Aperçu de Immunodiagnosis
1. concept de base
(1) anticorps (Ab) et antigènes (Ag)
Anticorps: Il se réfère à la protéine produite par le corps de protection en raison de l'antigène stimulation, sécrétée par effecteur B cellules chez les vertébrés, qui peut être divisé en IgG, IgM, IgA, igD, et IgE. IgG est le isotype avec la plus haute teneur en dans le sérum et les fluides corporels, comptabilité pour 75% à 80%. IgG est l'anticorps primaire produit par le secondaire réponse immunitaire, la "principale force" de la corps de anti-infection, et le plus utilisé anticorps dans immunodiagnosis.
Antigène: il se réfère à une substance qui peut provoquer la production d'anticorps et toute substance qui peut induire un immunitaire réponse dans le corps. Antigènes sont étrangères, macromoléculaires, et spécifique. La spécificité d'un antigène signifie que un antigène ne peut se lier au correspondant anticorps ou effecteur T cellules, qui groupes chimiques déterminer sur la molécule de surface, appelé déterminants antigéniques. Le poids moléculaire de l'antigène est généralement> 10kDa, et plus le poids moléculaire, le plus fort le antigénicité.
(2) anticorps polyclonaux et anticorps monoclonaux
Anticorps polyclonaux: naturel antigène molécules contiennent souvent une variété de différents épitopes antigéniques, stimuler le système immunitaire du corps avec cet antigène peut activer une variété de B cellulaire clones à la même temps, et le résultant anticorps vont contiennent une variété de anticorps contre différents épitopes, si ils sont appelés anticorps polyclonaux.
Les anticorps monoclonal est un très homogène anticorps produit par un unique B cellulaire clone que ne vise qu'une spécifique épitope. Il est généralement établi à partir d'hybridomes technologie. Effecteur B cellules et les cellules de myélome sont fusionnés pour former B cellulaire hybridomes. UN anticorps monoclonal peut produire par la culture d'une unique d'hybridomes dans une population de cellules spécifiques pour un épitope. L'affinité et la spécificité des anticorps monoclonaux sont généralement mieux que ceux de anticorps polyclonaux.
(3) anticorps recombinants et antigènes recombinants
Recombinant anticorps: UN génétiquement conçu anticorps est un anticorps produit in vitro en utilisant gène technologie de recombinaison et protéines l'ingénierie et de la technologie. Obtenir la séquence de l'anticorps, construire un vecteur d'expression, et transférer dans une expression hôte (comme la levure, les cellules des insectes, les cellules de mammifères, ou bactéries). De cette façon, la production d'anticorps est libéré de la contraintes de le système immunitaire. En même temps, à la fois plein-longueur anticorps et divers anticorps fragments peut produire.
Antigènes recombinants: Généralement, les antigènes recombinants se référer à protéines recombinantes en essence et sont également protéines produites in vitro par gène technologie de recombinaison et protéines l'ingénierie et de la technologie.
2. Principes de immunodiagnosis
(1) méthode de double anticorps monoclonal sandwich
Double anticorps monoclonal sandwich méthode: utiliser un solide de phase porteuse à manteau un anticorps et étiquette un autre anticorps marqué pour détecter l'antigène à être testé, et puis forme un complexe de enduit Ab-Ag-étiqueté Ab. Cette méthode principalement détecte substances antigéniques.
Crédit d'image: https://www.rockland.com/resources/elisa-technique/
(2) méthode indirecte
Méthode indirecte: une méthode de détection dans laquelle un solide-phase transporteur est utilisé pour immobiliser l'antigène et étiquette le secondaire anticorps. Cette méthode est principalement utilisé pour détecter les anticorps IgG dans des échantillons. UN complexe de la enduit Ag-cible Ab-étiquetés secondaire Ab est formé à détecter les anticorps dans l'échantillon.
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(3) méthode de Capture
Méthode de Capture: une méthode de détection dans laquelle un solide-phase transporteur est utilisé pour recouvrir les anticorps secondaire et une autre souche de étiquetés antigène à détecter les anticorps. UN complexe de la enduit secondaire Ab-cible Ab-étiquetés Ag est formé et testé. Cette méthode est principalement utilisé pour détecter IgM dans l'échantillon.
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(4) méthode de la concurrence
Méthode de la concurrence: de liaison compétitive de la enduit/anticorps marqué avec la étiquetés/enduit antigène et le test antigène. Cette méthode est principalement utilisé pour détecter mineur molécule antigènes.
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Méthode 1: manteau l'anticorps sur la phase solide, étiquette l'antigène, ajouter l'échantillon, l'antigène à être testé en concurrence pour la liaison de l'anticorps site, lavage, sortie le résultat
Méthode 2: manteau l'antigène à la phase solide, étiquette l'anticorps
3. Le développement de immunodiagnosis
Immunodiagnosis s'applique immunologie théories, techniques, et moyens de diagnostiquer les diverses maladies et déterminer le statut immunitaire. Avec la technologie développement, immunodiagnosis a subi immunoélectrophorèse, précipitations et l'agglutination essais, radioimmunodosage, immunofluorescence, enzyme-linked immunosorbent assay, immunoturbidimétrie, or colloïdal et fluorescent microsphère l'étiquetage, buvard membrane bandes, chimiluminescence, puces à protéines, microfluidique contrôle technologie et unique-molécule détection.
(1) Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA)
Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) est une méthode de détection qui combine la réaction immunitaire principe avec immobilisation technologie et enzyme technologie d'étiquetage. Première, utiliser un polystyrène multi-bien plaque à manteau l'antigène/anticorps, lier la substance à être testé dans l'échantillon, et ajouter raifort peroxydase (HRP) ou la phosphatase alcaline (AP) après le lavage pour étiquette l'anticorps/antigène pour former un immunitaire complexe. Puis ajouter une enzymatique chromogène substrat et une solution d'arrêt de résilier la réaction. Enfin, qualitativement ou quantitativement déterminer le contenu de l'échantillon l'analyte par la couleur OD.
Crédit d'image: https://www.biotekchina.com.cn/applications/elisa-and-related-immunoassays.html
(2) or colloïdal/fluorescence immunochromatographie
Or colloïdal: se référer à la or sol avec la dispersés phase particules diamètre entre 1 et 150 nm, et la couleur est orange-rouge au violet-rouge.
Or colloïdal immunochromatographie: une technique de détection qui utilise or colloïdal-anticorps marqué, utiliser la nitrocellulose membrane (NC membrane) comme une phase solide transporteur à manteau antigène/anticorps, et utilise l'action capillaire de la membrane NC à chromatographe le liquide d'un bout de la membrane à l'autre extrémité, en même temps, Une réaction immunitaire se produit pendant la chromatographie.
Fluorescence immunochromatographie: un dispositif de détection altère la technologie l'or colloïdal dans fluorescent microsphère l'étiquetage.
Crédit d'image: https://www.researchgate.net/figure/A-The-composition-of-colloidal-gold-test-strip-B-Principle-of-the-CG-test-strip_fig5_340176469
(3) Chemiluminescence immunologique
Chimiluminescence: se réfère à l'émission de lumière qui accompagne le processus de réactions chimiques.
Chemiluminescence immunologique méthode: une technique de détection qui utilise multi-bien plaque ou particules magnétiques comme solide transporteurs à manteau antigène/anticorps, ajouter la substance à analyser et luminophore à étiquette antigène/anticorps pour former un immunitaire complexe, après le lavage, chimiquement stimuler le complexe ou substrat à émettre de la lumière, et détermine le contenu de l'analyte par la luminescence intensité.
Crédit d'image: https://www.sepmag. L'ue/blog/offre/335317/la-deux-clé-raisons-pour-sélection-chimiluminescence-pour-tests immunologiques
(4) Classification de chemiluminescence immunologique
Classification par revêtement transporteur: Il est divisé en plaque chimiluminescence et magnétique des particules chimiluminescence. À l'heure actuelle, plaque chimiluminescence a été éliminé.
Classification par luminescence: divisé en indirecte luminescence (enzymatique), direct luminescence (acridine ester, luminol), et electrochemiluminescence.
